Western Blot 中蛋白質轉漬膜的重要性

Western Blot(西方點墨法）是實驗室中最常用於分析蛋白質表現的技術之一。它利用抗體與蛋白質的專一性來檢測特定蛋白質，但整個實驗流程繁瑣，從蛋白萃取、定量、SDS-PAGE電泳、轉漬、封閉、抗體選擇到訊號檢測，每一環節都可能影響最終結果。在這個過程中，蛋白質的轉漬(Transfer)可說是影響後續檢測靈敏度的關鍵步驟。

在 SDS-PAGE泳後，帶負電的蛋白質需被轉移到固相載體上，通常使用 硝酸纖維素膜（NC膜） 或 聚偏二氟乙烯膜（PVDF膜）。轉漬方法以藉由電場促使蛋白質從凝膠移動到膜上最為常用，形成與原先凝膠中蛋白帶一致的複本。成功的轉漬取決於多種因素，包括凝膠與膜的完全接觸、蛋白分子大小、電壓電流的大小、轉漬的時間、轉漬緩衝液組成以及膜的選擇，依想看的蛋白質分子大小需調整不同的轉漬條件。

膜的選擇對 Western Blot 的結果至關重要：
• NC膜：疏水性結合蛋白質，不需活化，操作方便、價格低廉，成本低，但操作需小心以防破損，且對小分子蛋白結合力較弱，易在洗滌過程中遺失。
• PVDF膜：與蛋白質親和力高，需在甲醇中活化，適合高靈敏度檢測與多次重用，但成本較高。

其中，BSP0161 Bio-Doc 0.2μm PVDF轉漬膜，具有高結合力與低背景的特性，能在保持清晰蛋白條帶的同時，降低非特異性吸附。其均一孔洞結構可確保大、小分子蛋白均能順利轉移，特別適合高靈敏度的免疫檢測。膜材質兼具高機械強度與柔軟性，不易破裂，並支援再次剝離與再檢測，是兼顧穩定性與重現性的理想選擇。

此外，轉漬效率可受蛋白大小影響，一般將大於100 KDa的蛋白視為大分子蛋白，需要較長時間或濕式轉印以確保充分轉移；分子量較小的蛋白則適合半乾式轉印，節省時間與緩衝液。緩衝液組成也很重要，SDS可增加蛋白溶解度，促進移動；甲醇能協助蛋白與膜結合，但過高濃度可能固定蛋白，不利於轉漬。濕式轉漬最好在低溫(4℃)進行，以避免凝膠局部溶化或轉漬效率下降。

Transfer Sandwich的製作同樣影響轉漬成敗。凝膠、膜與濾紙的面積應盡量一致（通常膜與濾紙需比凝膠大一些），操作時確保層與層之間無氣泡，並均勻碾壓，使膜與凝膠貼合緊密。蛋白質分子尺寸遠小於膜與凝膠間的距離，因此更緊密的接觸能顯著提高轉漬效率。

在轉漬完成後，可使用 預染分子量 Marker 或 可逆染劑 (如Ponceau S) 來檢查轉漬是否成功。相比之下，BDPM2500 蛋白質標記 3-color Regular Range Protein Marker 可同時提供多色對照、清晰分子量標示與轉漬效率判斷，無需額外染色步驟即可快速確認條帶位置與轉漬完整性，大幅提升操作便利性與實驗精準度。

總結而言， Western Blot 的核心價值在於精確檢測蛋白質表達，而蛋白質轉漬膜的選擇、操作與效率直接影響結果可靠性。選擇如 BSP0161 Bio-Doc 0.2μm PVDF轉漬膜 這類高品質膜材，能顯著提升訊號強度與重現性，搭配高辨識度的 BDPM2500 蛋白質標記 3-color Regular Range Protein Marker，可協助研究人員在每一次轉漬中獲得更穩定、更可靠的實驗結果。無論是膜材質、轉漬方式、緩衝液配方，或是操作細節的掌握，都決定了最終訊號的清晰度與重現性。對 Western Blot 實驗者而言，深入理解並掌握轉漬膜的相關技術，是確保蛋白質分析成功的基礎。

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